CD53 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419561

Übersicht

Cd53 kodiert CD53, ein tetraspanines, an der Zelloberfläche lokalisiertes Glykoprotein, das in Leukozyten angereichert ist und dabei hilft, Membran-Mikrodomänen zu organisieren und die Rezeptorsignalgebung zu koordinieren. CD53 ist an der Adhäsion, Migration und Aktivierung von Immunzellen beteiligt, indem es die Integrinfunktion moduliert und mit Signalkomplexen assoziiert, die das Zytoskelett-Remodeling sowie nachgeschaltete Kinase-Signalwege beeinflussen. In Mausmodellen sind Expressionsmuster und Funktion von CD53 eng mit B‑ und T‑Zell-Antworten, Antigenpräsentation und entzündlichen Signalnetzwerken verknüpft. Eine dysregulierte Organisation von Tetraspaninen, einschließlich veränderter CD53-abhängiger Interaktionen, wird häufig im Kontext von Immunfunktionsstörungen und der Biologie hämatopoetischer Zellen untersucht.

Das CD53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd53-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd53-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd53 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD53-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd53-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD53-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd53-Exone abzielen, die für die CD53-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd53-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD53 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd53-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD53 HDR-Plasmid (m) und CD53 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd53-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd53-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.