Particules Lentivirales d'Activation (h) CD47: sc-400508-LAC

Le CD47 humain code une protéine transmembranaire de la superfamille des immunoglobulines qui agit comme un signal clé de reconnaissance du « soi » via son interaction avec SIRPα sur les cellules myéloïdes, modulant la phagocytose et la surveillance immunitaire innée. CD47 se lie également à la thrombospondine‑1, influençant l’adhérence et la migration cellulaires, la signalisation du monoxyde d’azote, ainsi que les réponses vasculaires et inflammatoires. Grâce à ces interactions récepteur‑ligand, CD47 coordonne le remodelage du cytosquelette et les signaux de survie avec l’homéostasie tissulaire. Une expression dérégulée de CD47 a été associée à des phénotypes d’échappement tumoral au système immunitaire et à des altérations de la biologie inflammatoire et vasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et de la signalisation du microenvironnement.

Les particules d'activation lentivirales CD47 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CD47 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD47 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CD47, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD47. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CD47 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.