Plasmide Double Nickase (h) CD42c: sc-403712-NIC

GP1BB code pour la chaîne bêta de la glycoprotéine plaquettaire Ib (CD42c), un composant essentiel du complexe récepteur GPIb‑IX‑V qui assure l’accrochage et l’adhésion des plaquettes au facteur von Willebrand sous fort cisaillement. En coordination avec des protéines adaptatrices du cytosquelette et des nœuds de signalisation tels que les kinases de la famille Src et des voies dépendantes de la PI3K, CD42c contribue à l’activation plaquettaire, aux réponses procoagulantes et à la formation de thrombus. La perturbation génétique ou l’expression altérée de GP1BB compromet l’assemblage du récepteur à la surface cellulaire et la fonction plaquettaire, reliant cet axe à des troubles plaquettaires héréditaires caractérisés par une macrothrombocytopénie et des manifestations hémorragiques. Par conséquent, GP1BB est largement étudié dans des modèles de biogenèse plaquettaire, d’hémostase et de mécanotransduction pertinents pour la biologie vasculaire et la recherche sur la thrombose inflammatoire.

CD42c Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GP1BB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GP1BB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GP1BB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GP1BB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.