Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD42b: sc-401273-ACT

GP1BA code la chaîne alpha de la glycoprotéine de surface plaquettaire Ib (CD42b), un composant essentiel du complexe récepteur GPIb-IX-V, qui médie l’accrochage des plaquettes au facteur von Willebrand en conditions de fort cisaillement. Ce récepteur déclenche des événements de signalisation qui soutiennent l’adhésion et l’activation plaquettaires ainsi que la formation du thrombus, en lien avec le remodelage du cytosquelette et des processus en aval liés à la coagulation. Une expression ou une fonction altérée de GP1BA est associée à des défauts héréditaires d’adhésion plaquettaire tels que le syndrome de Bernard–Soulier et fait l’objet de nombreuses études dans le contexte des diathèses hémorragiques et du risque thrombotique. Comme CD42b est largement restreint aux mégacaryocytes et aux plaquettes, il constitue un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour l’étude de la biogenèse plaquettaire et des voies de signalisation de l’hémostase.

CD42b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GP1BA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD42b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GP1BA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GP1BA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD42b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GP1BA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD42b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD42b dans les cellules tumorales présentant une expression de GP1BA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.