CD42a Double Nickase Plasmid (h): sc-405500-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD42a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD42a Double-Nickase-Plasmid (h) und CD42a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GP9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD42a: sc-166420
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD42a Double Nickase Plasmid (h) | sc-405500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD42a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GP9 kodiert das Thrombozyten-Glykoprotein CD42a, einen zentralen Bestandteil des GPIb-IX-V-Rezeptorkomplexes, der unter hohen Scherkräften die Thrombozytenadhäsion an den von-Willebrand-Faktor vermittelt. Über diesen Komplex unterstützt CD42a die frühe Bildung des hämostatischen Pfropfs und koppelt die extrazelluläre Ligandenbindung an intrazelluläre Signalereignisse, die das Zytoskelett-Remodelling, die Thrombozytenaktivierung und die Stabilisierung des Thrombus regulieren. Eine Störung von GP9 beeinträchtigt die Oberflächenexpression und Funktion des GPIb-IX-V-Komplexes, verändert die Dynamik der Thrombozytenadhäsion und nachgeschaltete Aktivierungswege. Genetische Defekte in GP9 sind mit hereditärer Makrothrombozytopenie und Blutungsphänotypen vereinbar mit dem Bernard-Soulier-Syndrom assoziiert, wodurch GP9 ein nützlicher Lokus für die Untersuchung der Thrombozytenbiogenese und der Adhäsionssignalgebung ist.
CD42a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GP9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GP9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GP9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GP9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.