Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD36: sc-419545-ACT

Le gène murin Cd36 code CD36, un récepteur « scavenger » multifonctionnel de classe B qui se lie aux acides gras à longue chaîne et aux lipoprotéines oxydées afin de réguler l’absorption des lipides, leur gestion intracellulaire et le métabolisme énergétique. CD36 participe à des voies qui contrôlent le transport des acides gras, la signalisation inflammatoire et la formation de cellules spumeuses macrophagiques, reliant la détection des nutriments aux réponses immunitaires innées. Outre ses rôles dans le métabolisme du tissu adipeux, du muscle et du foie, l’activité de CD36 influence aussi la biologie vasculaire et les réponses au stress oxydatif via des interactions avec des lipides modifiés. Une expression ou une signalisation de Cd36 dérégulée a été associée à des phénotypes cardiométaboliques, à des processus liés à la résistance à l’insuline et à des pathologies entraînées par l’inflammation dans des modèles murins.

CD36 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cd36 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD36 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cd36 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cd36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD36. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cd36 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD36 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD36 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cd36 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.