Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD30L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423454
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD30L El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD30L, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD30L Anticuerpo (RM153): sc-19984
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD30L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423454 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Tnfsf8 codifica CD30L (TNFSF8), un ligando de membrana de tipo II de la superfamilia TNF que se une a CD30 (TNFRSF8) para modular la comunicación entre células inmunitarias. La señalización CD30L–CD30 influye en programas transcripcionales dependientes de NF-κB y MAPK que determinan la coestimulación de los linfocitos T, la producción de citocinas y la diferenciación inducida por la activación, y también puede afectar decisiones de supervivencia celular según el contexto celular. En modelos murinos, este eje se estudia con frecuencia en la organización del tejido linfoide, las respuestas del centro germinal y la regulación de redes de señalización inflamatoria relevantes para la disrregulación inmunitaria y fenotipos linfoproliferativos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD30L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tnfsf8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tnfsf8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tnfsf8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD30L.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tnfsf8 para la investigación de la señalización de CD30L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tnfsf8 críticos para la función de CD30L
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tnfsf8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD30L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD30L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tnfsf8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD30L (m) y el plásmido HDR CD30L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tnfsf8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tnfsf8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.