Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD300A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416522
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD300A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD300A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD300A Anticuerpo (MEM-260): sc-101318
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD300A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416522 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CD300A (también conocido como IRp60) codifica un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa predominantemente en células mieloides, incluidos monocitos, macrófagos y subpoblaciones de células dendríticas. A través de motivos inhibidores basados en tirosina del inmunorreceptor (ITIM) en su cola citoplasmática, CD300A recluta fosfatasas como SHP-1/2 para atenuar las cascadas de señalización activadoras y modular la producción de citocinas, la fagocitosis y las respuestas a complejos inmunes. La señalización de CD300A se entrecruza con vías de receptores de la inmunidad innata, ajustando los umbrales de activación inflamatoria y la comunicación entre células en microambientes tisulares. La alteración de la expresión o la señalización de CD300A se ha asociado con inflamación desregulada y con desequilibrios en la homeostasis inmunitaria en contextos como enfermedades autoinmunes y alérgicas, así como en investigación de inmunología tumoral.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD300A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CD300A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CD300A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CD300A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD300A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CD300A para la investigación de la señalización de CD300A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CD300A críticos para la función de CD300A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CD300A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD300A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CD300A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CD300A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD300A (h) y el plásmido HDR CD300A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CD300A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CD300A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.