CD3-ε Lentiviral Activation Particles (h): sc-400240-LAC

CD3E kodiert CD3-ε, eine essenzielle Untereinheit des T‑Zell‑Rezeptor(TCR)-CD3‑Komplexes, die die T‑Zell‑Entwicklung, die antigenabhängige Assemblierung des TCR sowie die Signaltransduktion an der Plasmamembran unterstützt. Über die Signalübertragung durch immunrezeptorbasierte Tyrosin‑Aktivierungsmotive (ITAM) in assoziierten CD3‑Ketten trägt CD3‑ε dazu bei, Kinasekaskaden unter Beteiligung von LCK und ZAP70 zu initiieren, was zur nachgeschalteten Aktivierung der MAPK‑, NF‑κB‑ und NFAT‑Signalwege führt, die die Zytokinproduktion und die T‑Zell‑Differenzierung regulieren. Eine veränderte Expression oder Funktion von CD3E ist mit Defekten bei der Selektion von Thymozyten und einer beeinträchtigten adaptiven Immunantwort verknüpft und wird häufig im Kontext von Immundefizienz, Immundysregulation und Tumorimmunologie untersucht.

CD3-ε Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CD3E-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CD3-ε Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CD3E-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CD3-ε-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CD3E-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.