CD3-ε CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400240-ACT

CD3E kodiert CD3-ε, einen essenziellen Bestandteil des T‑Zell‑Rezeptor(TCR)-CD3‑Komplexes, der die Antigenerkennung mit der intrazellulären Signalweiterleitung koppelt, die für die Thymozytenentwicklung und die Aktivierung peripherer T‑Zellen erforderlich ist. Über seine immunrezeptor-tyrosinbasierten Aktivierungsmotive (ITAMs) in den CD3‑Ketten unterstützt CD3‑ε frühe Kinasekaskaden unter Beteiligung von LCK und ZAP70 und vermittelt nachgeschaltete Signalwege wie NF‑κB, NFAT und MAPK, um Zytokinproduktion, Proliferation und Differenzierung zu regulieren. Störungen der CD3E‑Expression oder der Assemblierung des CD3‑Komplexes können die Signalisierungsschwellen des TCR beeinträchtigen, die Immunhomöostase verändern und zu Phänotypen der Immundysregulation beitragen. Als linienbestimmendes Molekül in T‑Zellen wird CD3‑ε in vitro breit in Studien zur Architektur der Rezeptorsignalübertragung, zu funktionellen Zuständen von T‑Zellen und in immunonkologischen Modellen eingesetzt.

CD3-ε Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD3E-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD3-ε Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD3E-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD3E-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD3-ε-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD3E-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD3-ε-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD3-ε-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD3E-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.