CD2AP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419542

Übersicht

Cd2ap kodiert das CD2-assoziierte Protein (CD2AP), ein Adapter- und Gerüstprotein, das den Umbau des Aktinzytoskeletts mit dem Membrantransport an spezialisierten Zellkontakten koordiniert. In Mauszellen ist CD2AP an Endozytose und vesikulärer Sortierung beteiligt, indem es mit Komponenten des Schlitzdiaphragmas und der endozytotischen Maschinerie interagiert, und unterstützt so die Zellpolarität und Barrierefunktionen. CD2AP-assoziierte Netzwerke überschneiden sich mit Signalwegen, die die Adhäsionsdynamik und die Zytoskelettorganisation steuern, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Stabilität von Zellkontakten und des Rezeptorumsatzes macht. Genetische Störungen von Cd2ap wurden mit Defekten der glomerulären Filtrationsbarriere und proteinurischen Nierenphänotypen in Verbindung gebracht; zudem wird es eingesetzt, um die Organisation der Immunsynapse und die Integrität von Epithelien in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.

Das CD2AP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd2ap-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd2ap-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd2ap nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD2AP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd2ap-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD2AP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd2ap-Exone abzielen, die für die CD2AP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd2ap-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD2AP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD2AP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd2ap-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD2AP HDR-Plasmid (m) und CD2AP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd2ap-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd2ap-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.