CD223 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406616-LAC

LAG3 (CD223) kodiert einen inhibitorischen Immun-Checkpoint-Rezeptor, der auf aktivierten T‑Zellen, regulatorischen T‑Zellen, NK‑Zellen sowie auf Subpopulationen erschöpfter Lymphozyten exprimiert wird. CD223 bindet an MHC‑Klasse‑II und weitere Liganden, um die TCR‑Signalübertragung abzuschwächen. Dadurch beeinflusst es die Funktion der Immunsynapse, die Zytokinproduktion und die Effektor-Differenzierung und ist in Signalwege eingebunden, die Aktivierungsschwellen und die Immunhomöostase regulieren. LAG3 ist bei chronischer Antigenexposition häufig hochreguliert und gilt als Kennzeichen von Programmen der T‑Zell‑Dysfunktion, die zusammen mit anderen Checkpoint-Molekülen auftreten. Veränderungen in Expression und Signalgebung von LAG3 werden daher in der Tumorimmunologie, in Modellen persistierender Virusinfektionen und bei autoimmuner Entzündung umfassend untersucht – als Determinanten für Immununterdrückung versus Immunaktivierungszustände.

CD223 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente LAG3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CD223 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der LAG3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CD223-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen LAG3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.