CD223 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421371-ACT

Lag3 kodiert CD223, einen inhibitorischen Immun-Checkpoint-Rezeptor, der auf aktivierten T‑Zellen, regulatorischen T‑Zellen, NK‑Zellen sowie auf Untergruppen dendritischer Zellen der Maus exprimiert wird. Die Bindung an CD223 moduliert die Stärke der TCR‑Signalübertragung und prägt die Effektor-Differenzierung, indem frühe Aktivierungswege abgeschwächt werden; dadurch trägt es zur peripheren Toleranz und zur Kontrolle entzündlicher Reaktionen bei. In Immunmikroumgebungen mit persistierender Antigenexposition ist CD223 mit Transkriptionsprogrammen verknüpft, die mit T‑Zell‑Dysfunktion und einer veränderten Zytokinproduktion einhergehen. Aufgrund seiner Rolle in der Checkpoint-Signalgebung und der Immunhomöostase wird Lag3 häufig in Modellen chronischer Entzündung, Infektion und Tumorimmunologie untersucht, um Mechanismen der Immunregulation aufzuklären.

CD223 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Lag3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD223 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Lag3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Lag3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD223-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Lag3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD223-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD223-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Lag3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.