CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400286-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der MRC1-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD206/Mannose Receptor/MMR: sc-376108
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-400286-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
CD206/Mannose Receptor/MMR CRISPR Activation Plasmid (h2) | sc-400286-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
MRC1 kodiert CD206, auch bekannt als Makrophagen-Mannose-Rezeptor (MMR), ein Typ‑I‑Transmembran‑C‑Typ‑Lektin, das überwiegend von Makrophagen und bestimmten Subpopulationen dendritischer Zellen exprimiert wird. CD206 bindet Mannose‑, Fucose‑ und N‑Acetylglucosamin‑haltige Glykane auf endogenen und mikrobiellen Liganden und unterstützt damit rezeptorvermittelte Endozytose, Phagozytose und Antigenverarbeitung. Über seine Funktionen bei Scavenging, Glykanerkennung und der Clearance von Glykoproteinen trägt MRC1 zur angeborenen Immunerkennung und zur Modulation entzündlicher Polarisierungsprogramme bei. Eine veränderte CD206‑Expression wird häufig als Marker alternativ aktivierter Makrophagen genutzt und wurde mit dem Umbau des Immunmikromilieus bei chronischer Entzündung, Fibrose und in der Tumorbiologie in Verbindung gebracht.
CD206/Mannose Receptor/MMR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MRC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
CD206/Mannose Receptor/MMR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MRC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MRC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD206/Mannose Receptor/MMR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MRC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD206/Mannose Receptor/MMR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD206/Mannose Receptor/MMR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MRC1-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.