Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD2 (m): sc-419537

Présentation

Le gène murin *Cd2* code CD2, un récepteur d’adhésion et de signalisation de la superfamille des immunoglobulines, exprimé principalement sur les lymphocytes T et les cellules NK, qui médiatise les contacts cellule–cellule par interaction avec des ligands tels que CD58/CD48. CD2 participe à la formation de la synapse immunologique et à la signalisation co-stimulatrice, modulant les seuils d’activation des lymphocytes T, le remodelage du cytosquelette et des voies en aval, notamment celles des kinases de la famille Src, de MAPK et de NF-κB. En influençant l’adhésion des lymphocytes, leur migration et leur différenciation effectrice, CD2 contribue à la régulation des réponses immunitaires adaptatives et de l’homéostasie immunitaire. Une signalisation et une adhésion dépendantes de CD2 dérégulées ont été impliquées dans des phénotypes immunitaires inflammatoires et associés à l’auto-immunité, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la fonction des lymphocytes T.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd2 pour l'étude de la signalisation de CD2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd2 essentiels à la fonction de CD2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD2 plasmide HDR (m) et le CD2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.