CD1C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403813-ACT

CD1C (CD1c-Molekül) ist ein nichtklassisches, MHC‑Klasse‑I‑ähnliches, antigenpräsentierendes Glykoprotein, das überwiegend auf Subpopulationen dendritischer Zellen und bestimmten B‑Zellen exprimiert wird. Dort bindet und präsentiert es Lipid- und Glykolipidantigene an T‑Zellen. Durch die Vermittlung der Präsentation mikrobieller und körpereigener Lipidliganden trägt CD1C zur Einleitung und Ausprägung adaptiver Immunantworten bei und beeinflusst im Kontext von Antigenverarbeitungs- und -präsentationswegen die Zytokinpolarisierung. CD1C‑positive dendritische Zellen sind an der Pathogenerkennung und am Crosstalk mit Programmen der angeborenen Immunität beteiligt und verknüpfen so die Verfügbarkeit von Lipidantigenen mit der T‑Zell‑Aktivierung und der Immunhomöostase. Veränderte CD1C‑Expression oder eine CD1c‑restriktierte Immunerkennung wurden bei entzündlichen und autoimmunen Erkrankungen, bei Reaktionen auf Infektionskrankheiten sowie bei tumorassoziiertem Immun‑Remodeling untersucht.

CD1C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD1C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD1C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD1C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD1C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD1C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD1C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD1C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD1C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD1C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.