CD1A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401734-ACT

CD1A kodiert ein nichtklassisches, MHC-Klasse-I-ähnliches antigenpräsentierendes Molekül, das vor allem auf dendritischen Zellen, einschließlich Langerhans-Zellen, stark exprimiert wird und dort Lipid- und Glykolipidantigene an T‑Zellen bindet und präsentiert. Durch die Steuerung der Lipidantigenpräsentation und der Priming-Prozesse von T‑Zellen trägt CD1A zur Immunüberwachung an epithelialen Barrieren bei und beeinflusst Zytokinprogramme, die adaptive Immunantworten modulieren. Eine veränderte CD1A-Expression sowie die Aktivität CD1A-restringierter T‑Zellen wurden mit entzündlichen Hauterkrankungen und Immunfehlregulation in Verbindung gebracht; außerdem wird CD1A häufig als Marker für Differenzierungs- und Reifungszustände dendritischer Zellen verwendet. In der biomedizinischen Forschung hilft die gezielte Beeinflussung von CD1A dabei, lipidgetriebene immunologische Signalwege und die Funktion antigenpräsentierender Zellen in humanen Systemen zu untersuchen.

CD1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD1A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD1A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD1A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD1A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD1A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD1A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD1A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD1A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD1A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.