Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CD14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400344
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CD14 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CD14, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD14 Anticuerpo (5A3B11B5): sc-58951
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CD14 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400344 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CD14 es un correceptor de reconocimiento de patrones anclado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que se une al lipopolisacárido bacteriano junto con LBP y transfiere los ligandos al complejo TLR4–MD-2 para iniciar la señalización inmunitaria innata. Actúa en monocitos, macrófagos y células dendríticas para amplificar las vías dependientes de MyD88 y TRIF, impulsando la activación de NF-κB e IRF, la producción de citocinas y la expresión de genes inflamatorios. Más allá de la detección de endotoxinas, CD14 contribuye al reconocimiento de diversos patrones moleculares asociados a patógenos y a daño, y modula la fagocitosis y la presentación de antígenos. La señalización desregulada de CD14 se ha relacionado con respuestas inflamatorias aberrantes implicadas en la biología de la sepsis, trastornos inflamatorios crónicos y fenotipos mieloides asociados a tumores relevantes para la regulación inmunitaria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD14 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CD14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CD14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CD14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD14.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CD14 para la investigación de la señalización de CD14, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CD14 críticos para la función de CD14
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CD14 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CD14 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CD14 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CD14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD14 (h) y el plásmido HDR CD14 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CD14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CD14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.