CD137L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423455

Übersicht

Tnfsf9 kodiert CD137L (4-1BBL), einen Liganden der TNF-Superfamilie, der vor allem auf antigenpräsentierenden Zellen exprimiert wird und an CD137 (TNFRSF9) bindet, um starke kostimulatorische Signale an T-Zellen und andere Immun-Effektorzellen zu vermitteln. Die CD137L–CD137-Signalübertragung fördert die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege und unterstützt dadurch T‑Zell-Expansion, Überleben, Zytokinproduktion und die Ausprägung von Gedächtnisantworten; zusätzlich beeinflusst sie die Reifung dendritischer Zellen und die Funktion myeloider Zellen. In Mausmodellen wird die Aktivität von Tnfsf9 mit der Regulation entzündlicher Schaltkreise und der Immunhomöostase in Verbindung gebracht und wirkt sich auf Kontexte wie Autoimmunität, chronische Entzündung und Tumor-Immunüberwachung aus. Diese Funktionen machen CD137L zu einem nützlichen Knotenpunkt, um kostimulationsabhängige Immunphänotypen und antigengetriebene Antworten zu untersuchen.

Das CD137L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnfsf9-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnfsf9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnfsf9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD137L-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnfsf9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD137L-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnfsf9-Exone abzielen, die für die CD137L-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnfsf9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD137L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD137L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnfsf9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD137L HDR-Plasmid (m) und CD137L HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnfsf9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnfsf9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.