Plasmide Double Nickase (m) CD133: sc-437381-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CD133 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD133 Double Nickase (m) et le plasmide CD133 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Prom1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD133 Antibody (E-11): sc-365537
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CD133 | sc-437381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CD133 | sc-437381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prom1 code la glycoprotéine membranaire pentaspan CD133, une protéine liant le cholestérol, enrichie dans les protrusions de la membrane plasmique, qui contribue à organiser les microdomaines membranaires et à réguler la polarité cellulaire. Dans les tissus murins, CD133 est largement utilisée comme marqueur des compartiments de cellules souches et progénitrices, et est associée à des programmes contrôlant l’autorenouvellement, la différenciation et la régénération tissulaire. La signalisation associée à CD133 recoupe des voies qui gouvernent l’organisation épithéliale et la dynamique du cytosquelette, et une expression altérée de Prom1 est rapportée dans des modèles de dégénérescence rétinienne, de défauts du neurodéveloppement et de phénotypes de cellules initiatrices de tumeurs. Les études fonctionnelles de Prom1 éclairent donc les mécanismes d’engagement de lignée, des épithéliums formant des barrières et des états cellulaires de type « souche » pertinents pour la biologie des maladies.
CD133 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Prom1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Prom1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Prom1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Prom1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.