CD133 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418263-ACT

PROM1 codifica o CD133, uma glicoproteína transmembranar pentapasso enriquecida em protrusões da membrana plasmática, onde contribui para a organização da membrana, o tráfego vesicular e a manutenção da polaridade celular. A expressão de CD133 é frequentemente usada para estratificar subpopulações com características de células-tronco e está ligada a programas que controlam a autorrenovação, a diferenciação e a adaptação metabólica em linhagens epiteliais e neurais. Na biologia do câncer, PROM1/CD133 é amplamente estudado como um marcador associado à heterogeneidade tumoral, a fenótipos de resistência a terapias e ao potencial metastático, oferecendo um ponto acessível para investigar redes regulatórias. Sua dinâmica de expressão também se cruza com vias que governam a remodelação do citoesqueleto e a sinalização do microambiente, tornando-o relevante para estudos de desenvolvimento e de transições de estado celular associadas a doenças.

CD133 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PROM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD133 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PROM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PROM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD133. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PROM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD133 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD133 em células tumorais com expressão de PROM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.