Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD13: sc-401095-ACT

ANPEP code pour CD13 (aminopeptidase N), une métalloprotéase membranaire de type II dépendante du zinc, qui clive à la surface cellulaire les acides aminés neutres situés en N‑terminal des peptides. CD13 participe au métabolisme des peptides et à la modulation des interactions cellule–cellule et cellule–matrice, influençant des processus tels que l’adhésion, la migration et la biologie de la lignée myéloïde. Par ses fonctions enzymatiques et non enzymatiques, CD13 est impliquée dans des réseaux de signalisation inflammatoire et dans le remodelage du microenvironnement extracellulaire. Des altérations de l’expression d’ANPEP/CD13 ont été associées à des contextes de tumeurs hématologiques et solides, ainsi qu’à des physiopathologies immunitaires et vasculaires, ce qui soutient son étude en tant que régulateur fonctionnel dans des états cellulaires pertinents pour la maladie.

CD13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANPEP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD13 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANPEP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANPEP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD13. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANPEP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD13 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD13 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANPEP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.