CCRK CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409545-ACT

CDK20 kodiert die zellzyklusbezogene Kinase (CCRK), eine Serin/Threonin-Kinase, die den Zellzyklusfortschritt und proliferative Signalwege über eine phosphorylierungsabhängige Regulation CDK-assoziierter Signalwege steuert. CCRK wird mit der Modulation der Wnt/β‑Catenin-Aktivität und weiter gefassten Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, die Wachstum, Differenzierung und die zelluläre Homöostase beeinflussen. Eine veränderte CDK20/CCRK-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter dysregulierte Proliferation und Verschiebungen im Gleichgewicht von Signalnetzwerken in der Krebsbiologie. Daher wird CDK20 häufig im Hinblick auf seine Rolle in der Kinase-Signalübertragung, der Zellzykluskontrolle und dem Crosstalk zwischen Signalwegen in menschlichen Zellen untersucht.

CCRK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK20-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CCRK Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK20-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK20-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CCRK-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK20-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CCRK-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CCRK-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK20-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.