CCK-AR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402419-ACT

Das humane **CCKAR** kodiert den Cholecystokinin‑A‑Rezeptor (CCK‑AR), einen GPCR der Klasse A, der durch Cholecystokinin‑Peptide aktiviert wird und verdauungsassoziierte Signalwege sowie nährstoffgetriebene Sättigungssignale reguliert. Nach Ligandenbindung aktiviert CCK‑AR G‑Protein‑Signalwege, die intrazelluläres Calcium und nachgeschaltete Kinasekaskaden modulieren und so sekretorische Antworten und die Kontraktilität glatter Muskulatur im Gastrointestinaltrakt koordinieren. Die CCKAR‑Aktivität überschneidet sich mit der neuroendokrinen Kommunikation zwischen Darm und Gehirn und beeinflusst zelluläre Programme, die mit Stoffwechsel und Energiebilanz verknüpft sind. Eine fehlregulierte CCKAR‑Signalübertragung wurde im Zusammenhang mit metabolischen Phänotypen und funktionellen Veränderungen des Gastrointestinaltrakts untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien zur rezeptorvermittelten Signaltransduktion unterstreicht.

CCK-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCKAR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CCK-AR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCKAR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCKAR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CCK-AR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCKAR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CCK-AR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CCK-AR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCKAR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.