CCDC90A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406721

概要

MCUR1（別名CCDC90A）は、ミトコンドリア内膜に局在するタンパク質をコードしており、ミトコンドリアカルシウムユニポーター（MCU）複合体を調節することでミトコンドリアへのカルシウム取り込みを支えます。マトリックス内Ca²⁺濃度を制御することにより、CCDC90Aはカルシウムシグナルを酸化的リン酸化、TCA回路酵素活性、ならびに細胞の生体エネルギー恒常性と結び付け、下流では活性酸素種（ROS）やストレス応答にも影響を及ぼします。MCUR1/CCDC90A機能の攪乱は、ミトコンドリア代謝の変化やミトコンドリア機能不全に対する脆弱性と関連づけられており、心代謝ストレス、神経生物学、がん細胞の代謝適応に関する研究で重要な分子です。ミトコンドリアのシグナル伝達ノードとして、カルシウム恒常性、アポトーシス感受性、ミトコンドリア品質管理をつなぐ経路の解析でしばしば検討対象となります。

CCDC90A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMCUR1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MCUR1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MCUR1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CCDC90Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CCDC90Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MCUR1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CCDC90Aの機能に不可欠なMCUR1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MCUR1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CCDC90A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCCDC90A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MCUR1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CCDC90A HDRプラスミド（h）および CCDC90A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMCUR1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMCUR1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。