CCDC69 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-424629-LAC

O gene murino Ccdc69 codifica a CCDC69, uma proteína contendo domínio coiled-coil implicada na organização do citoesqueleto e na progressão mitótica, com associações descritas a processos relacionados ao centrossomo e ao fuso mitótico que ajudam a manter a estabilidade do genoma. Proteínas de sustentação com motivos coiled-coil geralmente coordenam a montagem de complexos multiproteicos que regulam a dinâmica dos microtúbulos, a sinalização de checkpoints e a remodelação dependente do ciclo celular. Alterações na regulação dessas vias podem influenciar a proliferação, a aneuploidia e respostas ao estresse, tornando o Ccdc69 um alvo de interesse para estudar mecanismos que conectam a fidelidade da divisão a uma homeostase celular mais ampla. Em sistemas de modelo em camundongo, a modulação da expressão de Ccdc69 permite investigar efeitos em nível de vias no controle do ciclo celular e fenótipos relacionados a doenças, sem implicar desfechos clínicos.

As Partículas de Ativação Lentivirais CCDC69 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Ccdc69 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CCDC69 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Ccdc69, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CCDC69. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Ccdc69 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.