CBX7 Double Nickase Plasmid (h): sc-402903-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CBX7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CBX7 Double-Nickase-Plasmid (h) und CBX7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CBX7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CBX7: sc-376274
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CBX7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402903-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBX7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402903-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CBX7 (Chromobox 7) kodiert ein Chromodomänen-Protein der Polycomb-Gruppe, das H3K27me3 erkennt und die Assemblierung kanonischer PRC1-Komplexe unterstützt, um die Chromatinkondensation und eine stabile transkriptionelle Repression zu fördern. Durch die Regulation entwicklungsbezogener Genprogramme, von Zellzyklus-Checkpoints und zellulärer Seneszenz trägt CBX7 zur Aufrechterhaltung epigenetischer Gedächtnisinhalte und linienspezifischer Transkriptionszustände bei. Eine dysregulierte CBX7-Aktivität wird in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter Differenzierung und gestörter Proliferationskontrolle in Verbindung gebracht, einschließlich Krebs, wo Verschiebungen der Polycomb-vermittelten Stilllegung onkogene und Tumorsuppressor-Netzwerke umgestalten können. Als Chromatin-„Reader“ innerhalb der Polycomb-Signalwege wird CBX7 häufig untersucht, um zu verstehen, wie Histonmarkierungen interpretiert werden, um die genomweiten Transkriptionsausgänge zu steuern.
CBX7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CBX7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CBX7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CBX7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CBX7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.