CBX7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424634

Übersicht

Cbx7 kodiert das Chromobox-Protein-Homolog 7 (CBX7), einen chromodomänenhaltigen Leser von H3K27me3, der als Kernbestandteil des Polycomb-repressiven Komplexes 1 (PRC1) die stabile transkriptionelle Stilllegung aufrechterhält. In Mauszellen trägt CBX7 zur epigenetischen Kontrolle der Linienfestlegung, der Zellzyklusregulation und der Seneszenz bei, indem es die Chromatinkondensation fördert und Entwicklungs- sowie Tumorsuppressor-Loci reprimiert. Die CBX7-abhängige Polycomb-Aktivität überschneidet sich mit Differenzierungsprogrammen und Netzwerken der Selbsterneuerung von Stammzellen und prägt dadurch langfristige Genexpressionszustände. Eine Fehlregulation der Polycomb-vermittelten Repression, einschließlich veränderter CBX7-Funktion, wird im Zusammenhang mit Onkogenese, altersassoziierten Phänotypen und Entwicklungsstörungen breit untersucht – als Mechanismus einer aberranten Chromatinregulation.

Das CBX7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cbx7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cbx7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cbx7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CBX7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cbx7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CBX7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cbx7-Exone abzielen, die für die CBX7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cbx7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CBX7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CBX7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cbx7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CBX7 HDR-Plasmid (m) und CBX7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cbx7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cbx7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.