Plásmido CRISPR de Activación (h) CBP20: sc-404124-ACT

El gen humano **NCBP2** codifica **CBP20**, la subunidad pequeña del complejo nuclear de unión al capuchón que reconoce el cap 7‑metilguanosina en los transcritos nacientes de la ARN polimerasa II. Mediante su asociación con **CBP80** y su interacción con factores de empalme, exportación de ARNm y vigilancia del ARN, CBP20 ayuda a coordinar el procesamiento del pre‑ARNm, la competencia para la exportación nuclear y vías de control de calidad como la degradación mediada por codones de terminación prematuros (NMD). El reconocimiento del cap dependiente de CBP20 influye en programas de expresión génica durante la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés al moldear la maduración y la estabilidad de los transcritos. La desregulación del procesamiento y la exportación de ARN dependientes del cap se asocia con frecuencia a fenotipos de proliferación alterada y mantenimiento del genoma, lo que convierte a **NCBP2** en un objetivo relevante para estudios mecanísticos del metabolismo del ARN en contextos asociados a enfermedad.

CBP20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NCBP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CBP20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NCBP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NCBP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CBP20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NCBP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CBP20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CBP20 en células tumorales con expresión de NCBP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.