CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400648-NIC

CNR1 codifica o receptor canabinoide 1 (CB1), um GPCR acoplado a Gi/o que responde aos endocanabinoides para regular a atividade da adenilil ciclase, a sinalização cAMP/PKA, a condutância de canais iónicos e vias a jusante relacionadas com MAPK/ERK e PI3K. O CB1 é amplamente expresso no sistema nervoso e contribui para a transmissão sináptica, a libertação de neurotransmissores e a plasticidade dependente da atividade, com funções adicionais em processos metabólicos periféricos e relacionados com a imunidade. Alterações na sinalização CNR1/CB1 têm sido associadas a fenótipos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos, ao processamento da dor e à desregulação metabólica, tornando-o um alvo frequentemente estudado na farmacologia de GPCR e nos circuitos neuromodulatórios. Em modelos celulares, a perturbação de CNR1 é utilizada para investigar a dessensibilização/internalização do recetor, o viés de acoplamento a proteínas G e o “cross-talk” entre vias que afeta a excitabilidade neuronal e a sinalização inflamatória.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CNR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CNR1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CNR1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CNR1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.