Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cathepsin H Double Nickase Plasmid (h): sc-402601-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cathepsin H Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cathepsin H Double-Nickase-Plasmid (h) und cathepsin H Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CTSH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cathepsin H: sc-398527
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cathepsin H Double Nickase Plasmid (h) | sc-402601-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cathepsin H Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402601-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CTSH kodiert Cathepsin H, eine lysosomale Cysteinprotease, die hauptsächlich als Aminopeptidase wirkt und zu den letzten Schritten des intrazellulären Proteinabbaus beiträgt. Es ist am endolysosomalen Transport und an der proteolytischen Prozessierung beteiligt und beeinflusst dadurch die Antigenverarbeitung, den Umbau der extrazellulären Matrix sowie – in spezifischen Zellkontexten – die Verfügbarkeit von Peptidhormonen oder Wachstumsfaktoren. Eine fehlregulierte Cathepsin-Aktivität wird mit veränderter Proteostase, inflammatorischer Signalgebung und invasiven Zellverhaltensweisen in Verbindung gebracht, weshalb CTSH in Studien zu lysosomenabhängigen Stressantworten ein häufiges Ziel ist. Auch die Expression und Aktivität von CTSH werden in der Tumorbiologie und in der Funktion von Immunzellen untersucht, da das Gleichgewicht lysosomaler Proteasen Interaktionen im Mikromilieu modulieren kann.
cathepsin H Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CTSH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CTSH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CTSH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CTSH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.