cathepsin F CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405658

Übersicht

CTSF kodiert Cathepsin F, eine lysosomale Cysteinprotease der Papain-Familie, die zum proteolytischen Umsatz intrazellulärer und endozytierter Substrate beiträgt. Cathepsin F ist an der lysosomenvermittelten Degradation, am Autophagie‑Lysosomen‑Flux sowie an Antigenverarbeitungswegen beteiligt, die die zelluläre Homöostase und die Immunzellkommunikation prägen. Störungen der Aktivität lysosomaler Proteasen können über nachgelagerte Effekte auf den endo‑lysosomalen Transport die Proteinhomöostase, das Organellen‑Remodeling und die Verarbeitung der extrazellulären Matrix verändern. CTSF wurde im Zusammenhang mit neurodegenerativen und entzündlichen Phänotypen untersucht, bei denen lysosomale Dysfunktion und eine beeinträchtigte Proteostase zentrale mechanistische Merkmale sind.

Das cathepsin F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CTSF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CTSF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CTSF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die cathepsin F-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CTSF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der cathepsin F-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CTSF-Exone abzielen, die für die cathepsin F-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CTSF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom cathepsin F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom cathepsin F CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CTSF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das cathepsin F HDR-Plasmid (h) und cathepsin F HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CTSF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CTSF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.