Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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cathepsin D Double Nickase Plasmid (m): sc-419875-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cathepsin D Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cathepsin D Double-Nickase-Plasmid (m) und cathepsin D Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ctsd abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cathepsin D: sc-377299
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cathepsin D Double Nickase Plasmid (m) | sc-419875-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cathepsin D Double Nickase Plasmid (m2) | sc-419875-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Ctsd** kodiert **Cathepsin D**, eine lysosomale aspartische Endopeptidase, die nach der Anlieferung von endozytiertem und autophagischem Material an das Endo‑Lysosomen‑System sowohl die Massen- als auch die selektive Proteolyse vermittelt. Durch die Regulation von Proteinturnover, Lysosomenbiogenese und Antigenprozessierung beeinflusst Cathepsin D Programme der zellulären Homöostase, die mit dem Autophagie‑Lysosomen‑Flux, dem endosomalen Transport und Stressantworten verknüpft sind. Eine veränderte CTSD‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit Neurodegeneration und lysosomalen Speicherphänotypen in Verbindung gebracht sowie mit der Tumorbiologie, u. a. über Effekte auf das Remodeling der extrazellulären Matrix und Überlebenssignale im Mikromilieu. **Ctsd** wird daher in Mausmodellen häufig als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um lysosomale Dysfunktion, den Zusammenbruch der Proteostase und inflammatorische Signalgebung zu untersuchen.
cathepsin D Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ctsd-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ctsd abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ctsd-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ctsd-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.