Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin D (m): sc-419875
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- cathepsin D Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique cathepsin D, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cathepsin D Antibody (D-7): sc-377299
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin D (m) | sc-419875 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Ctsd* code la cathepsine D, une endopeptidase aspartique lysosomale essentielle au renouvellement intracellulaire des protéines et au maintien de l’homéostasie endolysosomale. La cathepsine D intervient dans le flux autophagique, la dégradation médiée par les lysosomes et la maturation de peptides bioactifs, influençant ainsi le traitement des antigènes et, plus largement, les réseaux de protéostasie. Une activité de CTSD perturbée est associée à une dysfonction lysosomale, une vulnérabilité neuronale et une altération de la signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la neurodégénérescence et des réponses au stress métabolique. Dans des modèles cellulaires et animaux, *Ctsd* est également utilisé pour explorer les interactions entre la fonction lysosomale, l’apoptose et les voies de contrôle qualité mitochondriale.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cathepsin D (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ctsd dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ctsd, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ctsd à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cathepsin D.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ctsd pour l'étude de la signalisation de cathepsin D, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ctsd essentiels à la fonction de cathepsin D
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ctsd pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le cathepsin D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le cathepsin D plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ctsd. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le cathepsin D plasmide HDR (m) et le cathepsin D (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ctsd pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ctsd définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.