Plasmide Double Nickase (h) catalase: sc-400353-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) catalase correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide catalase Double Nickase (h) et le plasmide catalase Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CAT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: catalase Antibody (H-9): sc-271803
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) catalase | sc-400353-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) catalase | sc-400353-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CAT** code la catalase, une enzyme hémique peroxysomale qui décompose le peroxyde d’hydrogène en eau et en oxygène afin de limiter les dommages oxydatifs. En contrôlant le niveau de peroxydes intracellulaires, la catalase contribue à l’homéostasie rédox, influence le métabolisme lipidique et la fonction des peroxysomes, et module les réseaux de signalisation en aval sensibles au stress. Des altérations de l’activité de la catalase ont été associées à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour la dysfonction métabolique, la neurodégénérescence, l’inflammation et la biologie des cancers, où les espèces réactives de l’oxygène peuvent remodeler les programmes transcriptionnels et l’intégrité des macromolécules. **CAT** est donc largement utilisé comme nœud d’étude pour évaluer la capacité antioxydante, les voies associées aux peroxysomes et la signalisation dépendante des ROS.
catalase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.