Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CaSR Plasmide Double Nickase (h): sc-401749-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CaSR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CaSR Double Nickase Plasmid (h) e il CaSR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CASR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CaSR Antibody (6D4): sc-47741
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CaSR Plasmide Double Nickase (h) | sc-401749-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CaSR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401749-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **CASR** codifica per il recettore sensibile al calcio (CaSR), un GPCR di classe C che rileva il Ca2+ extracellulare e coordina la segnalazione intracellulare per mantenere l’omeostasi del calcio. L’attivazione di CaSR si accoppia principalmente a vie mediate da Gq/11 e Gi/o, modulando la fosfolipasi C, la mobilizzazione di Ca2+ dipendente dall’inositolo trisfosfato e la segnalazione MAPK a valle, che influenza secrezione, eccitabilità e differenziamento. È di grande rilevanza per la fisiologia delle paratiroidi e del rene, dove regola il rilascio dell’ormone paratiroideo e la gestione del calcio nei tubuli renali. La deregolazione della segnalazione di CASR e la variazione genetica sono associate a disturbi dell’equilibrio del calcio e a fenotipi endocrini correlati, rendendo CaSR un nodo utile per studiare la segnalazione dei GPCR e l’omeostasi degli ioni minerali.
CaSR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CASR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CASR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CASR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CASR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.