Plasmide Double Nickase (m) caspase-9: sc-419470-NIC

Chez la souris, Casp9 code la caspase‑9, une protéase initiatrice à cystéine‑aspartate qui est activée dans la voie intrinsèque mitochondriale de l’apoptose après la libération du cytochrome c et l’assemblage de l’apoptosome avec APAF1. Une fois activée, la caspase‑9 clive des caspases effectrices telles que la caspase‑3 et la caspase‑7, coordonnant la mort cellulaire programmée, les réponses au stress mitochondrial et le remodelage des tissus au cours du développement. L’activité de la caspase‑9 est modulée par les protéines de la famille BCL‑2 et par les protéines inhibitrices de l’apoptose (IAP), ce qui la relie aux voies de signalisation des dommages à l’ADN, du stress du réticulum endoplasmique et du stress oxydant. Une apoptose dépendante de CASP9 dérégulée a été impliquée dans la biologie des cancers, les maladies neurodégénératives et l’homéostasie immunitaire, faisant de Casp9 un nœud central pour étudier les décisions de destinée cellulaire dans des modèles murins.

caspase-9 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Casp9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Casp9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Casp9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Casp9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.