caspase-10 Double Nickase Plasmid (h): sc-416840-NIC

CASP10 kodiert Caspase-10, eine initiierende Cystein-Aspartat-Protease, die in todesinduzierende Signalkomplexe (DISC) nachgeschaltet extrinsischer Apoptoserezeptoren wie FAS und TNFRSF10 (TRAIL-Rezeptoren) rekrutiert wird. Nach ihrer Aktivierung verarbeitet und verstärkt Caspase-10 apoptotische Signale über nachgeschaltete Effektor-Caspasen sowie durch Crosstalk mit mitochondrialen Signalwegen und prägt damit Zellschicksalsentscheidungen während der Immunhomöostase und unter entzündlichem Stress. Die CASP10-Aktivität überschneidet sich mit NF-κB- und Zytokinsignalkontexten, in denen apoptotische versus nicht-apoptotische Outcomes das Überleben und die Aktivierung von Lymphozyten beeinflussen. Genetische Variation oder eine Fehlregulation von CASP10 wurde mit Phänotypen der Immundysregulation und einer veränderten Apoptose-Empfindlichkeit in der Biologie hämatologischer und solider Tumoren in Verbindung gebracht, was CASP10 für mechanistische Studien der Todesrezeptor-Signalübertragung relevant macht.

caspase-10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CASP10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CASP10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CASP10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CASP10-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.