casein kinase Iδ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401839-ACT

CSNK1D kodiert die humane Casein-Kinase Iδ (CK1δ), eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die durch Phosphorylierung zahlreicher Substrate die zeitliche Abstimmung der zirkadianen Uhr, den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten und den vesikulären Transport koordiniert. CK1δ trägt über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle von Stabilität, Lokalisation und Abbau ihrer Substrate zu Signaltransduktionsnetzwerken bei, darunter die Wnt/β-Catenin- und Hedgehog-Signalwege. Indem CSNK1D die Phosphorylierung von Uhr- und Signalproteinen moduliert, beeinflusst es transkriptionelle Rhythmen und die Proteostase – Prozesse, die bei proliferativen und neurobiologischen Erkrankungen häufig gestört sind. Eine fehlregulierte CK1δ-Aktivität wurde mit veränderten zirkadianen Phänotypen und aberranten Signaloutputs in Verbindung gebracht, die sich mit onkogenen sowie neurodegenerationsassoziierten Signalwegen überschneiden.

casein kinase Iδ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CSNK1D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

casein kinase Iδ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CSNK1D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CSNK1D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen casein kinase Iδ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CSNK1D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von casein kinase Iδ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des casein kinase Iδ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CSNK1D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.