Plasmide CRISPR d'Activation (h) CART: sc-417375-ACT

Le gène humain **CARTPT** code le *cocaine- and amphetamine-regulated transcript* (**CART**), un précurseur de neuropeptides transformé en peptides bioactifs agissant comme neuromodulateurs et signaux neuroendocriniens. Les peptides CART participent à des circuits hypothalamiques qui contrôlent l’appétit, l’homéostasie énergétique et les comportements liés à la récompense, en intégrant les signaux endocriniens à l’activité synaptique. L’expression de **CARTPT** est régulée par l’activation neuronale et l’état métabolique, ce qui la relie à des voies impliquées dans l’alimentation, les réponses au stress et la signalisation dopaminergique. Une dérégulation de la signalisation **CARTPT/CART** a été associée, dans des contextes de recherche translationnelle, à des phénotypes métaboliques tels que l’obésité et des traits comportementaux liés à l’alimentation, ainsi qu’à des aspects de la biologie neuropsychiatrique et de l’addiction.

CART Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CARTPT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CART Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CARTPT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CARTPT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CART. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CARTPT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CART au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CART dans les cellules tumorales présentant une expression de CARTPT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.