Plásmido CRISPR de Activación (h) CARD 11: sc-402770-ACT

CARD11 (CARMA1) codifica una proteína de andamiaje que contiene un dominio de reclutamiento de caspasas, el cual acopla la señalización del receptor de antígeno a programas transcripcionales posteriores en los linfocitos. Tras la activación del receptor de células T o del receptor de células B, CARD11 promueve el ensamblaje del complejo CARD11–BCL10–MALT1 (CBM), lo que permite la activación de las vías de NF-κB, JNK y p38 MAPK que controlan la proliferación, la producción de citocinas y la supervivencia. La actividad desregulada de CARD11 se asocia con defectos en la señalización inmunitaria y con una activación aberrante de los linfocitos, y se han descrito alteraciones recurrentes en varios tumores malignos linfoides. Como nodo de señalización, CARD11 se estudia con frecuencia para desentrañar la señalización proximal del receptor, los eventos de señalización dependientes de ubiquitina y los resultados transcripcionales en la inmunidad adaptativa.

CARD 11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CARD11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CARD 11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CARD11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CARD11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CARD 11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CARD11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CARD 11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CARD 11 en células tumorales con expresión de CARD11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.