Carbonyl reductase 1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402755-ACT

Humanes CBR1 kodiert die Carbonylreduktase 1, eine zytosolische, NADPH‑abhängige Oxidoreduktase, die eine breite Palette reaktiver Aldehyde und Ketone in weniger reaktive Alkohole umwandelt. Durch die Verarbeitung von Carbonylverbindungen aus der Lipidperoxidation und anderen Elektrophilen trägt CBR1 zur zellulären Redoxhomöostase, zu oxidativen Stressantworten sowie zum Metabolismus endogener und xenobiotischer Carbonylverbindungen bei. Eine veränderte CBR1‑Aktivität wurde mit Unterschieden in der Kapazität zur Carbonyl‑Entgiftung und mit Redox‑Ungleichgewichten in der Krebsbiologie, bei Entzündungen und bei metabolischen Dysfunktionen in Verbindung gebracht, wodurch CBR1 für pathway‑basierte Studien zu oxidativen Schäden und adaptiver Stresssignalgebung relevant ist. Seine enzymatische Einordnung verknüpft es mit umfassenderen Netzwerken der Aldehyd‑Entgiftung und des NADPH‑Verbrauchs, die die Proteostase und das zelluläre Überleben unter Stress beeinflussen.

Carbonyl reductase 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CBR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Carbonyl reductase 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CBR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CBR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Carbonyl reductase 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CBR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Carbonyl reductase 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Carbonyl reductase 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CBR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.