CapZ-α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405348

Übersicht

CAPZA1 kodiert die Alpha-1-Untereinheit des Aktinfilament-kappenden Proteins CapZ, eines Heterodimers, das an die barbed ends (Plusenden) von F-Aktin bindet und so die Filamentverlängerung, den Umsatz sowie die Architektur von Aktinnetzwerken reguliert. Durch die Kontrolle der Aktindynamik trägt CapZ-α1 zu Prozessen des zytoskelettalen Umbaus bei, die Zellform, Adhäsion und Motilität zugrunde liegen, und es ist mit Signalwegen verknüpft, die mit der Aktinorganisation und der Mechanotransduktion in Zusammenhang stehen. Eine veränderte Regulation der Aktin-Kappung und der damit verbundenen zytoskelettalen Programme wird häufig mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorzellinvasion, Struktur und Kontraktilität von Kardiomyozyten sowie weitere Kontexte relevant sind, in denen aktinabhängiges Remodeling ein entscheidender Determinant des Zellverhaltens ist.

Das CapZ-α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CAPZA1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CAPZA1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CAPZA1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CapZ-α1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CAPZA1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CapZ-α1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CAPZA1-Exone abzielen, die für die CapZ-α1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CAPZA1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CapZ-α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CapZ-α1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CAPZA1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CapZ-α1 HDR-Plasmid (h) und CapZ-α1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CAPZA1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CAPZA1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.