Plasmide CRISPR/Cas9 KO CapZ-α1 (h): sc-405348

Présentation

CAPZA1 code la sous-unité alpha‑1 de la protéine de coiffage des filaments d’actine CapZ, un hétérodimère qui se lie aux extrémités barbées de la F‑actine afin de réguler l’élongation des filaments, leur renouvellement et l’architecture des réseaux. En contrôlant la dynamique de l’actine, CapZ‑α1 contribue aux processus de remodelage du cytosquelette qui sous-tendent la forme cellulaire, l’adhérence et la motilité, et il interagit avec des voies de signalisation liées à l’organisation de l’actine et à la mécanotransduction. Une régulation altérée du coiffage de l’actine et des programmes cytosquelettiques associés est fréquemment impliquée dans des phénotypes pertinents pour l’invasion des cellules tumorales, la structure et la contractilité des cardiomyocytes, ainsi que dans d’autres contextes où le remodelage dépendant de l’actine constitue un déterminant majeur du comportement cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CapZ-α1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CAPZA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CAPZA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CAPZA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CapZ-α1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CAPZA1 pour l'étude de la signalisation de CapZ-α1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CAPZA1 essentiels à la fonction de CapZ-α1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CAPZA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CapZ-α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CapZ-α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CAPZA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CapZ-α1 plasmide HDR (h) et le CapZ-α1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CAPZA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CAPZA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.