Cappuccino CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407008

Übersicht

Das humane Gen **BLOC1S4** kodiert **Cappuccino**, eine Kernkomponente des **Biogenesis of Lysosome-related Organelles Complex 1 (BLOC-1)**, der den endosomalen Membrantransport und die Sortierung von Frachtproteinen koordiniert, die für die Reifung spezialisierter Organellen erforderlich sind. Die Funktion von BLOC-1 unterstützt Vesikelabschnürung, Recycling und die Zustellung von Proteinfracht durch das Endosomen–Lysosomen-System und beeinflusst dadurch Prozesse wie die Biogenese von Pigmentgranula sowie sekretorische Wege in spezialisierten Zellen. Eine Störung von BLOC-1-Untereinheiten beeinträchtigt den intrazellulären Transport und die Vesikeldynamik, was für Erkrankungen mit Beteiligung lysosomenverwandter Organellen relevant ist und darüber hinaus mit neuroentwicklungsbezogenen und synaptischen Phänotypen in Verbindung steht, die mit einer Dysfunktion des endosomalen Traffickings zusammenhängen. Daher wird **BLOC1S4** häufig im Kontext der endosomalen Sortierung, der Organellenbiogenese und der Folgen veränderter Membrantransportprozesse auf Signalweg-Ebene untersucht.

Das Cappuccino CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BLOC1S4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BLOC1S4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BLOC1S4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cappuccino-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BLOC1S4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cappuccino-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BLOC1S4-Exone abzielen, die für die Cappuccino-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BLOC1S4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cappuccino CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cappuccino CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BLOC1S4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cappuccino HDR-Plasmid (h) und Cappuccino HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BLOC1S4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BLOC1S4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.