CAMTA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405328-ACT

Il gene umano **CAMTA1** codifica il *calmodulin-binding transcription activator 1*, una proteina nucleare legante il DNA che integra la segnalazione Ca2+/calmodulina con il controllo trascrizionale. CAMTA1 partecipa alla regolazione di programmi di espressione genica legati alla differenziazione neuronale, alla funzione sinaptica e alle risposte allo stress cellulare, in linea con i suoi ruoli nella regolazione trascrizionale associata alla cromatina. Un’alterata attività di CAMTA1 è stata associata a fenotipi del neurosviluppo e a disfunzione cerebellare, e cambiamenti genomici che coinvolgono CAMTA1 sono stati riportati in numerosi studi di profilazione tumorale, a sostegno della sua utilità come bersaglio di ricerca in reti trascrizionali rilevanti per la malattia. Queste caratteristiche rendono CAMTA1 un nodo utile per analizzare le vie trascrizionali dipendenti dal calcio e i circuiti di regolazione genica a valle.

CAMTA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAMTA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CAMTA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAMTA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAMTA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CAMTA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAMTA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CAMTA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CAMTA1 nelle cellule tumorali con espressione di CAMTA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.