Plasmide CRISPR d'Activation (h) CAMTA1: sc-405328-ACT

Le gène humain CAMTA1 code l’activateur transcriptionnel 1 liant la calmoduline, une protéine nucléaire se liant à l’ADN qui intègre la signalisation Ca2+/calmoduline au contrôle transcriptionnel. CAMTA1 participe à la régulation de programmes d’expression génique liés à la différenciation neuronale, à la fonction synaptique et aux réponses au stress cellulaire, ce qui concorde avec ses rôles dans la régulation transcriptionnelle associée à la chromatine. Une activité altérée de CAMTA1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à un dysfonctionnement cérébelleux, et des modifications génomiques affectant CAMTA1 ont été rapportées dans plusieurs études de profilage tumoral, ce qui étaye son intérêt comme cible de recherche dans des réseaux transcriptionnels pertinents pour les maladies. Ces caractéristiques font de CAMTA1 un nœud utile pour disséquer les voies de transcription dépendantes du calcium et les circuits de régulation génique en aval.

CAMTA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAMTA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CAMTA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAMTA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAMTA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CAMTA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAMTA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CAMTA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CAMTA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CAMTA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.