CaMKKβ Double Nickase Plasmid (h): sc-400928-NIC

CAMKK2 kodiert die calcium-/calmodulinabhängige Proteinkinase-Kinase 2 (CaMKKβ), eine übergeordnete Ser/Thr-Kinase, die die Ca2+-Calmodulin-Signalübertragung mit der Phosphorylierung von AMPK sowie CaMKI/CaMKIV verknüpft und dadurch zelluläre Energiesensorik, Transkriptionsprogramme und calciumabhängige Stressantworten koordiniert. Über diese Knotenpunkte beeinflusst CaMKKβ die metabolische Umprogrammierung, die mitochondriale Funktion, Autophagie sowie nachgeschaltete Signalwege wie mTOR- und CREB-assoziierte Signale. Die Aktivität von CAMKK2 wurde u. a. im Kontext des Stoffwechsels von Krebszellen, von Entzündungen und der Polarisierung von Immunzellen sowie der neuronalen Signalübertragung untersucht, was es zu einem nützlichen Ziel für die Analyse calciumgetriebener Kinasekaskaden macht. Eine Störung von CAMKK2 kann Proliferations- und Überlebensphänotypen verändern und wurde in experimentellen Systemen mit krankheitsrelevanten Veränderungen der metabolischen und neuroendokrinen Regulation in Verbindung gebracht.

CaMKKβ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CAMKK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CAMKK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CAMKK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CAMKK2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.