Plásmido Doble Nickase (h) CaMKII delta: sc-400811-NIC

CAMK2D codifica CaMKII delta, una quinasa de serina/treonina dependiente de Ca2+/calmodulina que integra señales intracelulares de calcio en programas de fosforilación que controlan el acoplamiento excitación–contracción, la organización del citoesqueleto y la transcripción génica. CaMKII delta participa en cascadas de señalización dependientes de Ca2+ aguas abajo de canales iónicos y receptores acoplados a proteína G, modulando vías como la señalización MAPK y respuestas transcripcionales mediadas por CREB y reguladores relacionados. En tejidos humanos, la actividad de CAMK2D se estudia con frecuencia en el contexto de la fisiología cardíaca y del músculo liso, donde las alteraciones en el manejo del calcio y en la señalización de quinasas se asocian con fenotipos de remodelado maladaptativo. La desregulación de la señalización de CaMKII delta también se ha investigado por sus funciones más amplias en respuestas al estrés, supervivencia celular y redes de señalización inflamatoria relevantes para la investigación cardiometabólica y neurovascular.

CaMKII delta El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAMK2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAMK2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAMK2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAMK2D alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.