Plásmido CRISPR de Activación (h) CaMKII beta: sc-402744-ACT

CAMK2B codifica la subunidad beta de CaMKII, una quinasa de serina/treonina dependiente de Ca2+/calmodulina que integra transitorios de calcio intracelular en programas de fosforilación que controlan la señalización sináptica y la plasticidad estructural. CaMKII beta contribuye al ensamblaje del holoenzima, al direccionamiento subcelular y a las interacciones con el citoesqueleto de actina que determinan la remodelación de las espinas dendríticas y la neurotransmisión dependiente de la actividad. En neuronas, CAMK2B participa en vías vinculadas a la señalización del receptor NMDA, la potenciación a largo plazo/la depresión a largo plazo y la regulación génica dependiente de calcio. La desregulación de la señalización de CaMKII y los cambios en redes asociados a CAMK2B se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la función y la plasticidad de los circuitos neuronales.

CaMKII beta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CAMK2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CaMKII beta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CAMK2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CAMK2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CaMKII beta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CAMK2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CaMKII beta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CaMKII beta en células tumorales con expresión de CAMK2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.