Calregulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400775

Übersicht

CALR kodiert Calregulin, ein multifunktionales Chaperon des endoplasmatischen Retikulums (ER) und ein Ca²⁺-bindendes Protein mit hoher Kapazität, das die Qualitätskontrolle der Proteinfaltung sowie die intrazelluläre Calciumhomöostase unterstützt. Calregulin ist am Calnexin/Calregulin-Zyklus beteiligt, koordiniert die Reifung von Glykoproteinen und deren Retention im ER und trägt zur ER-Stress-Signalgebung sowie zur Unfolded-Protein-Response (UPR) bei. Über das ER hinaus beeinflusst CALR die Antigenpräsentation über die Assemblierung von MHC-Klasse-I-Komplexen, moduliert Zelladhäsion und -migration über integrinbezogene Prozesse und greift in Ca²⁺-abhängige Signalwege ein. Eine fehlregulierte CALR-Aktivität wurde in unterschiedlichen Krankheitskontexten mit veränderter Proteostase und Immun-Signalgebung in Verbindung gebracht, darunter hämatologische Erkrankungen und die Biologie solider Tumoren, was CALR zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der ER-Funktion und der Regulation von Zellzuständen macht.

Das Calregulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CALR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CALR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CALR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Calregulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CALR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Calregulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CALR-Exone abzielen, die für die Calregulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CALR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Calregulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Calregulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CALR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Calregulin HDR-Plasmid (h) und Calregulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CALR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CALR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.