Plasmide Double Nickase (h) Calpain 5: sc-403881-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Calpain 5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Calpain 5 Double Nickase (h) et le plasmide Calpain 5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CAPN5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Calpain 5 Antibody (A-5): sc-271271
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Calpain 5 | sc-403881-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Calpain 5 | sc-403881-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAPN5 code la calpaïne 5, une protéase à cystéine dépendante du calcium appartenant à la famille des calpaïnes, qui module la protéolyse régulée de substrats intracellulaires. L’activité des calpaïnes contribue au remodelage du cytosquelette, à la dynamique membranaire et à la transduction du signal en couplant les flux de calcium à des événements de maturation dépendants de protéases, lesquels influencent les programmes d’adhésion, de migration et de survie cellulaires. CAPN5 a été associé à la biologie rétinienne et à la signalisation inflammatoire, et des variations génétiques ont été liées à des vitréorétinopathies héréditaires ainsi qu’à des réponses immunitaires aberrantes de type inflammatoire dans les tissus oculaires. Ces caractéristiques font de CAPN5 un nœud d’étude utile pour explorer la protéostasie déclenchée par le calcium, les réponses au stress et des mécanismes dégénératifs spécifiques des tissus dans des modèles cellulaires humains.
Calpain 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAPN5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAPN5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAPN5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAPN5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.